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標題: 月季組織培養技術 [打印本頁]

作者: earsowwn1235    時間: 2013-2-25 08:40     標題: 月季組織培養技術

一、培養意義

    月季屬薔薇科薔薇屬多年生草本植物,每年多次開花,而且香味怡人,在觀賞植物中地位很高。另一大優點是分佈極廣,適應性強,栽培容易。使得月季無愧於“花中皇后”之美譽,古今中外文人墨客詠歎月季的佳作,不勝枚舉。多倫縣就是一個月季之鄉,但品種比較單一,更新換代緩慢。隨著組織培養技術的應用,多倫縣農業技術推廣中心於2000年11月引進組織培養全套設備,成功培育了大量優質月季組培苗,填補了市場空白,對加速新老品種更新換代,迅速普及名優新品種起到了重要作用。

    二、培養程式

    (一)無菌培養的建立

    (1)選條

    從中國科學院、中國農科院等一級科研機構引進6個月季優良品種,分別是“紅雙喜”、“白雪山”、“彩雲”、“和平”、“皇冠”、“金絲鳥”。選取生長健壯的當年生枝條,用飽滿而未萌發的側芽作為外植體。以枝條中段芽最好,因為接種後,中段芽第5天左右就能萌發,而基部和梢部的芽往往遲至15天才萌發。

    (2)培養基的配製

    整個培養過程都可用MS培養基,誘導芽萌發所加的植物激素只需要BA一種即可,每升用0.3~1.Omg,6個品種均適用,只是萌發遲早有些差別。

    (3)清洗外植體

    采回的枝條切去葉,再剝去附在莖上的葉柄及皮刺,先整段用洗手刷沾濃洗衣粉水仔細刷洗,再用自來水沖洗,毛巾擦幹,放置在小木板上,用利刀切成2~3釐米一段,每段至少一個側芽,裝入消毒過的培養皿,放在超淨工作臺上,打開紫外燈,做表面滅菌30分鐘。

    (4)消毒與接種

    在超淨工作臺上,用飽和漂白粉上清液作表面滅菌25~30分鐘,滅菌時間快到時,即傾去滅菌溶液,用無菌水涮洗數次,無菌紗布吸幹莖段外表水分,按無菌操作要求,接種到小試管裏,從芽萌發到芽長到1釐米左右需要2~3周。

    (5)培養

    培養溫度21℃最好,最高不超過25℃,有晝夜溫差,光照10~12小時/天,光強800~1200LX。

    (二)繼代增殖

    (1)將上述無菌芽從原莖段上切下,轉接到MS+BA1-2+1AA0.1-0.3或MS+BA1-2+NAA0.01-0.1的培養基上,促使嫩莖長出更多的側芽,原莖段棄去。繼代增殖培養基每升用蔗糖30克。

    (2)5周後,“紅雙喜”增殖了3.5倍,“白雪山”4.1倍,“和平”、“彩雲”5~6倍,“皇冠”、“金絲鳥”達15倍。

    (3)每5~6周做一次繼代增殖,繼代前先製備好培養基,然後在無菌操作條件下,將月季嫩莖切成1~2節一段,投入新鮮的增殖培養基上,月季小苗就會按幾何級數增殖起來,也可以將大苗轉入到生根培養基上。

    (4)壯苗培養

    ?對增殖倍率高的品種,所增殖的嫩莖很細弱,要求進行一次壯苗培養,以取得適合生根和今後移栽的苗子。壯苗培養的培養基為:MS+BA0.3-0.5+NAA0.01-0.1,如果並不特別強調繁殖速度,也可以一直使用這種培養基,以壯苗為主,增殖為輔,使增殖與壯苗合為一步。?培養條件。光照10~12小時/天,光強800~1800LX,溫度20~23℃,最高24~26℃。

    (5)生根與移栽

    月季嫩芽生長到一定長度時,就應切割下來,轉入生根培養基。切下的嫩芽長度以2~3釐米為宜,讓幼苗基部傷口癒合,已長出根原基,幼根尚未長出,即出瓶種植。這種方法不會損傷根系,移栽速度快,成活率高。

    (a)以MS培養基為基礎,配方為MS+NAA0.5,此外加入300mg/L活性炭,30g/L蔗糖。插植2釐米以上無根嫩莖,經2周左右出現根原基,幼根尚未長出即出瓶種植。

    (b)移栽。幼苗出瓶後,先洗去沾附的瓊脂培養基,再種植到粗沙+園田土(1:3)介質中,總的原則是疏鬆透氣,有一定的保水、保肥能力。種植密度2~3釐米×4~6釐米/株,移栽完畢澆透水,並用0.1%的百菌清、多菌靈或甲基托布津等噴霧保苗,能顯著提高成活率。

    (c)移栽後管理。移栽後需保持相對濕度85%以上,在溫室、拱棚中移栽,覆好遮蔭網,一般成活率都比較高,並注意通風和溫度管理。4~6周後,須做好第二次移植,通常植入5釐米×9釐米的塑膠杯中,每杯種1苗,再經4~6周,地上、地下部分都充分生長,有些植株還能開花,此時即可出售,或上盆種植,利於觀賞。

    (d)移栽後植保工作。首次移栽1周後,可少量的追肥,視苗大小,濃度逐漸由0.1%提高到0.3%左右,施用種類有複合肥、尿素、磷酸二氫鉀,MS培養液等,通常每7~10天噴一次殺菌劑,如百菌清等保苗,也可結合噴藥施肥,以減少管理用工。試管苗第二次移栽後,管理上仍不可放鬆,須注意除草、施肥、防治病蟲害,及時掐去頂芽,尤其是花蕾,以促進側芽的生長,促使早日壯大。

    三、影響月季增殖的因素

    1.BA用量及側芽在莖段上的位置對側芽發育的影響。用“和平”品種月季的枝條,均等分為6段,取每段的一個側芽培養在無激素的MS基本培養基上,23天後可見接近枝條最頂端和緊挨著枝條基部的芽發育最慢,而枝條中部的芽發育比較快。

    在不同濃度BA的MS培養基上,BA含量為0.03~0.3毫克/升的培養基,促進“皇冠”“彩雲”側芽的發育,如果BA超過O.3mg/L,則延遲芽的發育,但對於莖段中部的芽影響較小。

    2.摘心對莖增殖的影響。在繼代培養的接種操作時,切去嫩芽的頂芽後,再轉接到新的培養基上,對嫩芽增殖有很大的促進作用。

    3.赤黴素的影響。試用了赤黴素,其濃度為0.1、0.3、1、3、10、30和100毫克/升,試驗發現所有濃度都抑制莖增殖,隨著其濃度增高,莖增殖數下降,赤黴素濃度增加,還出現細長的嫩莖和發育不全的葉子,畸型植株等。

    4.嫩芽長度對形成多芽苗的影響。莖尖在1~10毫米長短時,對形成多芽苗最有效,不但百分率高,而且每個莖段的側枝數也比較多,切割過短或過長都對莖的增殖不利,芽苗形成較少。切割過長會表現出葉子衰老等不利的現象,最適宜的莖尖長度為6~10毫米。

    5.每次繼代培養所需時間對嫩莖增殖的影響。在MS+BA3+IAA0.3的培養基上,“紅雙喜”月季的培養時間為28天,繼代一次較好,超過28天,莖的數目已不再增加。

    6.MS配方和無機鹽濃度。試驗證明,全量的MS無機鹽對莖增殖效果最好。

    四、影響月季生根和移栽成活率的因素

    1.不同生長素種類和濃度對月季生根和移栽成活率的影響。以“彩雲”為材料,用NAA、IAA兩種不同濃度的生長素做生根試驗,發現用NAA誘導生根和提高移栽成活率效果最好,濃度為100ppm為宜,發現以IAA誘導生根和提高移栽成活率效果並不理想,其濃度只能在1mg/L以下,超過時對生根的促進作用已不顯著,反而大幅度降低移栽成活率。

    2.無機鹽濃度和含糖量對月季生根的影響。採用較低濃度的無機鹽對月季生根效果較好。但糖濃度不可降低。否則削弱苗的生長勢。試驗證明1/2MS+30克/升蔗糖利於生根。

    3.瓊脂用量及對生根的影響。瓊脂粉用量在4~5克/升的範圍內對生根效果影響沒有顯著差別,以4克/升稍優,用最小不利於凝固,用量大培養過硬不利於紮根。

    五、結論

    用組織培養的方法生產月季試管苗不僅生產週期短,而且繁殖倍數高,周年均可生產,年可生產月季試管苗50萬株,經濟效益,社會效益都很可觀,建議業界同仁能夠關注此項事業。




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